г.Екатеринбург:

Клиника "Уральская" тел: 8 (343) 288-5-200

ул. Чекистов, 16   ул. Уральская, 57/2

МЦ "Уральский" 

ул. П. Тольятти, 11-а тел: 8 (343) 233-92-95

г.Первоуральск: ул. Ватутина, д.28 тел: 8 (3439) 64-86-40

ПН - ПТ: 8.00 - 20.00

СБ: 8.00 - 18.00

ВС: 9.00 - 18.00

г.Первоуральск СБ-ВС: 9.00 - 18.00

Генотипирование варфарина

Главная / Научная деятельность / Генотипирование варфарина

Оценка возможности применения генотипирования цитохрома P450CYP2C9 методом ПЦР для выявления больных с высоким риском геморрагических осложнений антикоагулянтной терапии антагонистами витамина К.

д.м.н.Соколова Л.А., Широкова Н.В., Бубенщиков А.В., Девянина Н.А.

Медицинский центр Клиника «Уральская», УГМА г. Екатеринбург, Россия

Введение.

Антагонисты витамина К (АВК) - оральные антикоагулянты, являются препаратами выбора для длительной профилактики тромботических осложнений.

Подбор дозы и лечение АВК должны осуществляться под обязательным контролем протромбинового теста с представлением результата в виде нормализованного международного отношения (МНО). Стандартным уровнем принято считать диапазон МНО от 2 до 3, при котором достигается необходимый в большинстве случаев уровень антитромботической защиты.

Основной сложностью лечения АВК является необходимость индивидуального подбора дозы препарата. Это обусловлено, с одной стороны, узким диапазоном концентраций АВК, обеспечивающих эффективную профилактику тромботических осложнений при минимальном повышении риска кровотечений, с другой - значительными различиями чувствительности больных к АВК, в частности к варфарину.

Индивидуальная чувствительность к варфарину обусловлена в первую очередь полиморфизмом цитохрома P450CYP2C9, метаболизирующего варфарин. Активность этого цитохрома детерминирована генетически носительством *1, *2 или *3 аллеля в его гене.

Многочисленными исследованиями показано, что необходимая суточная доза варфарина у носителей мутантных аллелей CYP2C9*2 и CYP2C9*3 существенно ниже, чем у лиц с генотипом CYP2C9*1. Генотипирование пациентов, нуждающихся в терапии варфарином, по цитохрому Р450 позволит прогнозировать ответ на антикоагулянтную терапию и выявить пациентов с высоким риском геморрагических осложнений.

В лаборатории клинического гемостаза ООО «Урал-Лазер» наблюдаются 563 больных, находящихся на антикоагулянтной терапии варфарином. Низкие дозы препарата (<= 2,5 мг/сут.) принимают 65 больных - 11,54%. В этой группе больных  в период подбора дозы достоверно чаще отмечались геморрагические осложнения в виде макрогематурии, носовых кровотечений, кровоизлияний в мягкие ткани.

 

Всего больных, принимающих
варфарин

Низкие дозы
(<= 2,5 мг/сут.)

Геморрагич. осложнения (всего)

Геморрагич. осложнения в группе с низкими дозами (<= 2,5 мг/сут.)

Геморрагич. осложнения
в группе со средними и высокими дозами (>2,5 мг/сут.)

563 - 100%

65-11,54%

15 - 2,66%

11 - 16,9%

4 - 0,8%

 

Целью работы была оценка возможности использования тест-систем «SNP-экспресс» чувствительность к варфарину-1 (Arg144Cys) и чувствительность к варфарину-2 (IIe359Leu) производства НПО «Литех» (г. Москва).

Материалы и методы.

Материалом для исследования служила геномная ДНК человека, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь» НПО «Литех» (г. Москва). С образцом выделенной ДНК проводились две реакции амплификации - с двумя парами аллель-специфических праймеров с помощью тест-систем  «SNP-экспресс» чувствительность к варфарину-1 (Arg144Cys) и чувствительность к варфарину-2 (IIe359Leu) производства НПО «Литех» (г. Москва).

Детекция продуктов амплификации проводилась методом горизонтального электрофореза в агарозном геле.

Результаты и обсуждение.

Обследованы 2 группы больных, принимающих варфарин. Первую группу (n=26) составили пациенты, у которых для достижения  и поддержания МНО в терапевтическом диапазоне требуются средние и высокие дозы препарата (>2,5 мг/сут.; от 2,5 мг до 16 мг). В этой группе было выявлено 5 (19,2%) больных, являющихся носителями мутантных аллелей гена цитохрома P450CYP2C9.

Вторую группу (n=15) обследованных составили пациенты, принимающие низкие дозы варфарина (<= 2,5 мг/сут.; от 1,25 до 1,875 мг). Результаты выявления мутантных аллелей гена P450CYP2C9 в группе 2 представлены в таблице.

P450CYP2C9*2 Arg144Cys

P450CYP2C9*3 IIe359Leu

P450CYP2C9*2 Arg144Cys P450CYP2C9*3 IIe359Leu

6 чел. - 40%

4 чел. - 26,7%

2 чел. - 13,3%

Всего во второй группе было выявлено 12 пациентов, являющихся носителями мутантных типов гена P450CYP2C9, что составило 80%. Нормальный (или «дикий») аллель P450CYP2C9*1 присутствует у 3 (20%) больных.

Таким образом, генотипировании цитохрома P450CYP2C9 в 80% можно выявить пациентов с высоким риском кровотечений.

В последнее время появились данные о влиянии полиморфизма гена VKORC1 на действие антикоагулянтов антагонистов витамина К. Ген VKORC1 кодирует субъединицу 1 комплекса эпоксид-редуктазы витамина К. Этот фермент переводит неактивную форму витамина К, поступающего в организм, в активную форму. У людей, являющимися носителями генотипа Т/Т скорость синтеза, а потому и концентрация фермента внутри клетки минимальная, поэтому для блокады работы фермента требуются малые дозы препарата. У людей, имеющих генотип С/С скорость транскрипции гена максимальная, а поэтому для блокады фермента требуются большие дозировки.

Одновременное определение генотипов цитохрома P450CYP2C9 и фермента VKORC1 позволит улучшить прогнозирование оптимальной дозы варфарина еще до его применения и повысить безопасность антикоагулянтной терапии. Американское агенство FDA включило исследование полиморфизма VKORC1, наряду с полиморфизмом P450CYP2C9, в число рекомендуемых перед назначением лечения антагонистами витамина К.

Выводы.

1.Применение тест-системы «SNP-экспресс» чувствительность к варфарину-1 (Arg144Cys) и чувствительность к варфарину-2 (IIe359Leu) производства НПО «Литех» (г. Москва) позволяет  в 80% случаев выявить пациентов с высоким риском геморрагических осложнений.

2.Для повышения безопасности антикоагулянтной терапии необходимо параллельное определение полиморфизма гена VKORC1.

 

Новости

09 Сентября 2018

25 сентября по Хронической сердечной недостаточности

05 Сентября 2018

Теперь Клиника "Уральская" есть в инстаграме, подписывайтесь @uralclinic

04 Сентября 2018

Приглашаем на медицинскую коррекцию фигуры 

Все новости
Данный сайт использует файлы cookie и прочие похожие технологии. В том числе, мы обрабатываем Ваш IP-адрес для определения региона местоположения. Используя данный сайт, вы подтверждаете свое согласие с политикой конфиденциальности сайта.
ОК