г.Екатеринбург:

Клиника "Уральская" тел: 8 (343) 288-5-200

ул. Чекистов, 16   ул. Уральская, 57/2

МЦ "Уральский" 

ул. П. Тольятти, 11-а тел: 8 (343) 233-92-95

г.Первоуральск: ул. Ватутина, д.28 тел: 8 (3439) 64-86-40

ПН - ПТ: 8.00 - 20.00

СБ: 8.00 - 18.00

ВС: 9.00 - 18.00

г.Первоуральск СБ-ВС: 9.00 - 18.00

Микробиологический пейзаж и нарушения микробиоценоза влагалища, выявляемые методом ПЦР

Главная / Научная деятельность / Микробиологический пейзаж и нарушения микробиоценоза влагалища, выявляемые методом ПЦР

Н.В. Широкова, Н.А. Девянина, Л.А. Соколова.

Медицинский центр Клиника "Уральская", г. Екатеринбург

Микробиоценозы возникли в местах контакта человеческого организма с окружающей средой - кожа, слизистая желудочно-кишечного тракта, влагалище  находятся в состоянии динамического равновесия с изменяющимися условиями внешней среды. Микробиоценоз различных органов и полостей человека является весьма чувствительной индикаторной системой, которая способна реагировать качественными и количественными изменениями на любые физиологические и патологические сдвиги в состоянии макроорганизма и препятствовать инвазии патогенных микроорганизмов.

Влагалище с присущей ему микрофлорой образуют единую экосистему, в которой вагинальная среда контролирует микрофлору, а микрофлора, в свою очередь, оказывает воздействие на вагинальную среду [1-3].

К числу наиболее частых гинекологических заболеваний относится бактериальный вагиноз. Бактериальный вагиноз - это полимикробный невоспалительный синдром, возникающий из-за резкого дисбаланса вагинальной микрофлоры, вызванного замещением доминирующих микроорганизмов рода Lactobacillus ассоциацией различных бактерий, в том числе Garасоваnerella vaginalis. [4]

По данным различных авторов, на его долю приходится от 1/3 до 1/2 всех вульвовагинальных инфекций нижнего отдела половых путей [5, 6]. Следует отметить, что при бактериальном вагинозе нарушается микробиоценоз влагалища и возрастает роль условно-патогенной эндогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе снижается концентрация лактобацилл, повышается количество анаэробной и грамотрицательной флоры, в частности Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis, Mobiluncus spp и др. [7].

Отмечаемый рост бактериального вагиноза, который занимает ведущее место в структуре акушерско-гинекологической заболеваемости, во многом обусловлен экономическими, экологическими причинами, иммунологическими нарушениями, изменениями гормонального гомеостаза, массивным и нерациональным применением различных лекарственных средств, особенно антибиотиков [8]. У 60% женщин, страдающих бактериальным вагинозом, выявляются нарушения микроэкологии толстой кишки -  дисбактериоз кишечника, что позволяет предположить наличие дисбиотического процесса в организме с выраженным проявлением его либо в репродуктивной, либо в пищеварительной системе [9].

В связи с вышеизложенным, нами проведено исследование по выявлению нарушений микробиоценоза влагалища и условнопатогенной флоры у женщин г. Екатеринбурга методом ПЦР-диагностики.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследовано 152 образца цервикальных соскобов и отделяемого задненижнего свода влагалища, взятых цервикальной цитологической щеточкой или универсальным зондом и помещенных в 500 мкл транспортной среды у женщин в возрасте от 19 до 65 лет.

Выделение ДНК из клинического материала проводилось с использованием набора «ДНК-сорб-АМ», производства ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора (г. Москва) по методике, прилагаемой к набору.

Выявление и количественное определение ДНК Gardnerella vaginalis и микроорганизмов рода Lactobacillus spp. в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции проводилось при помощи тест-системы «АмплиСенс Gardnerella vaginalis/Lactobacillus spp.-титр», производства ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора (г. Москва)  по методике, прилагаемой к набору, на приборе Rotor-Gene 3000 (фирмы «Corbett Research», Австралия) в режиме real-time. Расчет концентрации ДНК Gardnerella Vaginalis и Lactobacillus spp. в 1 мл клинического материала проводится по формуле:

KДНК  Gv/ml = KДНК Gv * коэффициент

KДНК Lsp/ml = KДНК Lsp* коэффициент, где

КДНК  Gv/ml - количество копий ДНК Gardnerella vaginalis в реакции,

КДНК Lsp/ml - количество копий ДНК Lactobacillus spp. в реакции,

Коэффициент 100 - учитывает долю объема ДНК в пробирке от объема клинического материала и количество копий амплифицируемого гена в геноме микроорганизма.

Расчет коэффициента соотношения  концентрации ДНК Gardnerella vaginalis и ДНК Lactobacillus spp. проводится по формуле:

                                    КСLsp-Gv = lg[КДНК  Lsp/ml]- lg [KДНК Gv/ml]

КС < -1.0 - высокая вероятность бактериального вагиноза

KC> 2.0 - низкая вероятность бактериального вагиноза

Выявление ДНК микроорганизмов родов Gardnerella, Ureaplasma, Mycoplasma (виды hominis  и  genitalium), Chlamidiya, грибов рода Candida, CMV, HCV I, II, а также Trichomonas vaginalis и Neisseria gonirrhoeae проводилось при помощи соответствующих тест-систем, производства ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора (г. Москва)  по методикам, прилагаемых к тест-системам, на приборе ТерЦик (фирмы «ДНК технология», Россия) методом с «горячего старта».

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Из 152 исследуемых образцов высокая вероятность бактериального вагиноза выявлена  в 21, что составило 13,8% , низкая вероятность бактериального вагиноза установлена в  78 образцах - 51,3% соответственно. Кроме того, 53 образца исследуемого материала (34,9%) попали в так называемую «серую зону», у которых коэффициент соотношения  больше или равен -1.0 и ниже или равен 2.0. Таким образом, результаты исследования на бактериальный вагиноз выглядят следующим образом (Рис. 1):

 

У пациенток с высокой вероятностью бактериального вагиноза количество лактобацилл колебалось от 102 до 106 копий ДНК/мл, гарднерелл - 105 - 108 копий ДНК/мл.   Бактериальный вагиноз  представляет собой комплекс изменений, как в качественном, так и в количественном соотношении в вагинальной микрофлоре, которые характеризуются резким снижением количества или отсутствием преимущественно лактобактерий, продуцирующих Н2О2 [10]. Резкое снижение уровня Н2О2-продуцирующих лактобактерий, вплоть до их полного исчезновения, является первичным проявлением комплекса предшествующих патологических сдвигов. На фоне понижения количества лактофлоры происходит заселение влагалища G.vaginalis.

У пациенток с  низкой вероятностью бактериального вагиноза количество лактобацилл колебалось от 104-108 копий ДНК/мл,  а гарднереллы или отсутствовали вовсе, или были в количестве до 104 копий ДНК/мл. Ведущее место в вагинальном микроценозе занимают микроаэрофильные лактобактерии [11]. Лактобактерии, колонизируя слизистую влагалища, участвуют в формировании экологического барьера и обеспечивают тем самым резистентность вагинального биотопа. Защитные свойства лактобактерий реализуются по-разному: за счет  способности продуцировать лизоцим, перекись водорода и их адгезии на клетки вагинального эпителия. Однако основным механизмом, обеспечивающим колонизационную устойчивость вагинального биотопа, является способность лактобактерий к кислотообразованию. Молочная кислота - продукт метаболизма лактобактерий. Она образуется в процессе деструкции гликогена вагинального эпителия лактобактериями и определяет кислую реакцию рН вагинального содержимого, которое в норме составляет 3,8-4,5.

Таким образом, лактофлора, ее концентрация и совокупность свойств является определяющим фактором состояния вагинального микроценоза [12].

У пациенток, попавших в так называемую «серую зону» соотношение лактобациллы/гарднереллы составило 1:1 - 1:2. Такое соотношение бактериальной флоры может косвенно указывать на дисбиотические нарушения в кишечнике, которое  пока еще не проявилось в репродуктивной системе организма.

Кроме исследования на бактериальный вагиноз,  проведено исследование на наличие условнопатогенной флоры, сопутствующей бактериальному вагинозу.

Выделение условнопатогенной флоры у женщин, обследованных на бактериальный вагиноз

Выделяемая флора

Количество обследованных

% положительных находок

Gardnerella vaginalis

152

82.2

Ureaplasma spp.

123

73.9

Mycoplasma hominis

89

23.6

Mycoplasma genitalium

93

4.3

CMV

56

17.8

HCV I, II

53

3.8

Chlamidiya trachomatis

105

7.6

Candida albicans

38

18.4

 

Обнаружение гарднерелл, микоплазм, грибов рода кандида у женщин с низкой вероятностью бактериального вагиноза и у пациенток, попавших в так называемую «серую зону», говорит о том, что эта флора в норме присутствует в организме человека. И проявление ее деятельности в виде бактериального вагиноза может быть спровоцировано множеством факторов: нарушением иммунологического статуса, нарушениями гормонального гомеостаза, нерациональным применением лекарственных средств, особенно антибиотиков[8].

Таким образом, применение метода ПЦР для определения возможности развития бактериального вагиноза вполне оправдано. У пациенток, попавших в так называемую «серую зону» (коэффициент соотношения  больше или равен -1.0 и ниже или равен 2.0) рекомендуется проводить исследования на бактериальный вагиноз в динамике, с учетом клинических проявлений.

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.Ленцер А.А., Ленцер Х. П. Актуальные проблемы микроэкологии человека // В кн.: Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция. - Горький,  - 1988. -С. 10-14.

2.Савичева А. М., Башмакова М. А. Микробиоценозы влагалища и их регуляция // Тез. докл. научн. конф. "Дисбактериозы и эубиотики". - М., - 1996. - С. 33.

3.Larsen B. Vaginal flora in health and disease // Clin. Obstet. Ginecol. - 1993, - Vol 36 - №1, - рр. 107-21.

4. Бактериальный вагиноз. Информационно-методическое письмо. // - М., - 2008

5. Коршунов В.М., Володин Н.И., Ефимов Б.А. и соавт. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбиозах. -  М,  - 1999.

6. Байрамова ГР. Клинические особенности и эффективность различных методов терапии бактериального вагиноза: Авто-реф. дис. ...канд. мед. наук. - М., - 1996;  - 25 с.

7. Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы. Под ред. проф. В.Н.Прилепской - М.: Медпресс, - 2000.

8. Байрамова Г.Р., Прилепская В.Н. Этиопатогенез, диагностика и современные направления в лечении бактериального вагиноза.// - Русский медицинский журнал. - 2002. - Т. 10. - №18.

9.  Кудрявцева Л.В., Ильина Е.Н. Бактериальный вагиноз. Пособие для врачей. - М., - 2001.

10. Eshenbach D.A., Davick P.R., Williams B.L. et al. Prevalence of hydrogen peroxide-producing Lactobacillus species in normal women and women with bacterial vaginosis // J. Clin. Microbiol. - 1989.  - Vol. 27, - pp. 251-257.

11. Corbach S. L., Menda K. B., Thadepalli H., Keith L. Anaerobic microflora of the cervix in healthy women // Am. J. Obstet. Ginecol.  - 1973,  - Vol. 117, - pp. 1053-1055.

12.Соловьева И. В. Характеристика микрофлоры влагалища в норме и патологии // Дисс. канд. мед. наук.,  - Москва, - 1987. 

Новости

20 Сентября 2017

Возможны перебои в работе колл-центра по теническим причинам.

18 Сентября 2017

Центр динамического наблюдения «Здоровое сердце» в Клинике "Уральская"!

17 Сентября 2017

Приглашаем пройти в нашей клинике "Уральская": 17 августа, 7 сентября 2017 года.

Все новости
Данный сайт использует файлы cookie и прочие похожие технологии. В том числе, мы обрабатываем Ваш IP-адрес для определения региона местоположения. Используя данный сайт, вы подтверждаете свое согласие с политикой конфиденциальности сайта.
ОК